C начала 2006 г. на проводится научно-исследовательская работа по  фармакогностическому изучению травы Падуба Парагвайского -   Herba Ilicis Paraguariensis  - Йерба Мате.

В качестве образцов для анализа было выбрано сырье, собранное и заготовленное по традиционной технологии, принятой в Аргентине, в провинции Миссионес  (упакованные в Аргентине торговые марки: "La Hoja", "Don Lucas", "Palermo", "Andresito", "Rios Organica", "AURA","Insignia","Mate Rojо", "Flor de Obera" ) и сырье, заготовленное промышленным способом, как упакованное, так и завезенное из Европы, широко представленное на российском рынке (торговые марки "Nadin", "Форсман" и др., "Union", "Taragui", "Amanda", "Cruz de Malta", "Cachamai", "Aguantadora","Natura","Rosamonte","Kraus"," La Tranquera"  и др.).

Проведенное  исследование включало сбор и анализ информации, содержащей сведения об исследованиях Йерба Мате (Падуба Парагвайского) как биологически активного сырья, фармакогностическое изучение сырья с целью создания нормативных документов, призванных защитить российский рынок от подделок.

В связи с растущей популярностью напитка Йерба Мате в России, и появлением в печати и на телевидении  недостоверных сведений об этом растении и его действии, была  поставлена задача систематизировать информацию, касающуюся биологической активности Йерба Мате.

Основная часть научных исследований Падуба Парагвайского  (Йерба Мате) производилась в следующих научных организациях:

■ Национальный институт Yerba Mate, INYM, Аргентина
■ Национальный Университет de La Plata, Буэнос Айрес, Аргентина
■ Университет Рио Гранде, Бразилия
■ Институт фармакогнозии и фитохимии, Швейцария
■ Фармацев-кий факультет Университета Луи Пастера, Франция
■ Факультет фармакологии  Мадридского Университета,  Испания
■ Университет Фридриха Вильгельма,  Бонн, Германия
■ Монреальский Университет, Монреаль, Канада
■ Иллинойский Университет, США
■ Федеральный  Университет Пилотас, Бразилия

Рекомендованное медицинское применение Падуба Парагвайского - Йерба Мате в различных странах:

	Показания к применению
Южная Америка	Подавление аппетита, ожирение,  ревматизм, физическая усталость, истощение, гипертензия, снижение общей сопротивляемости организма, переутомление, снижение памяти, астения, невралгия, подагра, мышечная слабость, цинга, отравления; как стимулятор ЦНС, как желчегонное средство, как кардиотоническое средство, регулятор деятельности сердца,  как мочегонное, слабительное, утолитель жажды, стимулятор, при заживлении ран, при отравлениях.
Европейский  Союз	При астении (слабости), при нервных расстройствах, при депрессии, при физической усталости, при подагре, при мигрени, как регулятор сердечной деятельности, при ожирении, при ревматизме, при спазмах, как мочегонное, в диетах по снижению веса (усиление гликогенолиза и липолиза)
США	Подавление аппетита, при артрите, как слабительное, замедления старения, при отеках, для увеличения выносливости и общей сопротивляемости организма, при переутомлении, как противоаллергическое, при мигрени, регулятор деятельности сердца, нервных расстройствах, при ожирении, при стрессе, как мочегонное, как стимулятор ЦНС.

Фармакогностическое изучение травы Падуба Парагвайского (Йерба Мате).

В исследовательской работе особое внимание было уделено описанию внешних признаков и микроскопичес-кого строения сырья. Это объясняется тем фактом, что в зарубежной литературе часто встречается информация о фальсификации Йерба Мате путем замены части сырья в партии на внешне очень похожее сырье (в частности листьями манго). Так как Падуб Парагвайский (Йерба Мате) рассматривается как лекарственное растение с необходимой разработкой нормативной документации на данное растение, необходимо установить критерии   подлинности (соответствие сырья наименованию, под которым оно поступило) и доброкачественности (соответствие сырья всем пунктам нормативной документации) сырья.

При анализе перечисленных марок Йерба Мате, представленных в России в качестве стандартов сравнения использовали сырье Йерба Мате, заготовленное традиционными методами, с использованием продолжительной сушки и выдержки, а также сырье, заготовленное промышленным способом, которые были проанализированы в Национальном Институте Йерба Мате, INYM, республика Аргентина.

Рис. 2. Стойкая пена за счет сапонинов 

Химический анализ Падуба Парагвайского включил в себя установление основных групп действующих веществ и их количественное определение в сырье и водном извлечении соответственно. В результате проведенных качественных реакций и тонкослойной хроматографии (ТСХ) в различных системах растворителей в траве Падуба Парагвайского  (Йерба Мате) было     доказано наличие следующих групп соединений:

Группы соединений в сырье Падуба Парагвайского – Йерба Мате:

1.Алкалоиды ксантинового ряда:
    - Кофеин
    - Теофиллин
    - Теобромин
2. Тритерпеновые сапонины
МАТЕ - сапонины №1,2,3,4,5– в основе урсуловая кислота.
3. Флавоноиды
    - рутин
    - кверцетин
       и др.
4. Дубильные вещества   4-10%
5. Витамины
    - витамины группы В
    - витамин С
    - витамины А;РР;Р;К;Е
6. Вещества различной структуры
     - хлорофилл, холин, органические кислоты и др.
7.     Фенольные гликозиды
8.     Микроэлементы: 
     - Mg,Zn,Cu,K,Mn,Ca,Fe,Si,Р

Рис.3 ТСХ тритерпеновых сапонинов при просмотре в УФ свете.

Алкалоиды ксантинового ряда  были качественно определены с использованием ТСХ, в качестве подвижной фазы использовали смесь хлороформ: ацетон в соотношении 9:1, детектирование кофеина проводили по собственной флуоресценции в УФ-свете (темно-синее пятно на светящемся зеленом фоне). На хроматограмму «Merck» наносили хлороформное и водное извлечения из сырья. Значение Rf полученных зон абсорбции  сравнивали со значением Rf стандартов кофеина и теобромина.  В результате проведенной тонкослойной хроматографии  в сырье доказано наличие кофеина и теобромина. Кофеин количественно определяли спектрофотометрически, определяя оптическую плотность хлороформного извлечения при длине волны 272 нм.

Сапонины были качественно определены в результате  проведения качественных реакций: реакции пенообразования. Хроматографический анализ сапонинов проводился в системе хлороформ: метанол: вода в соотношении 61:32:7 на пластинках «Merck».                                                               

В качестве проявителя использовали 20% H2SO4.

В результате на хроматограмме обнаружено пять зон адсорбции, соответствующих МАТЕ - сапонинам.

Определение флавоноидов так же проводили по качественным реакциям и ТСХ. Реакция с алюминия хлоридом и цианидиновая проба на флавоноиды  дали положительный результат.

Рис. 4Оптическая плотность комплекса флавоноидов с AlCl3.

Дальнейшая хроматография в тонком слое сорбента была проведена с использованием нескольких  систем растворителей (10% уксусная кислота; 15% уксусная кислота; смесь бутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4:1:5), в результате сравнения Rf полученных зон абсорбции с Rf стандартных образцов рутина и кверцетина в сырье, доказано их присутствие.

Флавоноиды в сырье и водном извлечении определяли спектрофотометрическим методом в пересчете на рутин, снимая оптическую плотность комплекса флавоноидов с  алюминия хлоридом при длине волны 415нм.

Наличие дубильных веществ в сырье и водном извлечении   подтверждено  реакцией с железо-аммонийными квасцами (черно-синее окрашивание), их содержание количественно определено по методике Государственной Фармакопеи XI издания пермангонатометрическим титрованием. 

Заключение:

В результате проведенных исследований были установлены критерии подлинности и показатели качества сырья  Падуба Парагвайского- Herba Ilicis Paraguariensis- Йерба Мате.

Определены основные группы соединений, содержащихся в сырье и отвечающих за фармакологические эффекты Йерба Мате. Содержание  действующих веществ в Йерба Мате напрямую зависит от состава почвы, местопроизрастания, соблюдения методического процесса заготовки - просушивание свежесобранного сырья не позднее 24 часов после сбора в течение длительного времени, от 9 до 24 часов, при постоянной температуре  и последующей выдержки в мешках до 2-х лет. Доказано, что  выраженность тонизирующего эффекта Йерба Мате зависит непосредственно от содержания тритерпеновых сапонинов. Неправильная заготовка  и хранение заметно снижает содержание тритерпеновых сапонинов, вызывая их гидролиз. Значения содержания кофеина в различных образцах  Йерба Мате не сильно различаются. Так же выявлено высокое содержание дубильных веществ в сортах Йерба Мате, заготовленных промышленным способом, что может быть обусловлено местом произрастания и бедностью почвы, а также ускоренной технологией просушивания сырья, отсутствием необходимой выдержки. Дубильные вещества способны образовывать прочные комплексы с действующими веществами в составе Йерба Мате, снижая процент их перехода в извлечение.

Выявлена  антиоксидантная активность Йерба Мате, благодаря присутствующим в составе флавоноидам.

Исследование процесса экстракции Йерба Мате способом «МАТЕ» с  использованием традиционных аксессуаров: Вычищенной тыквы вида «Lagenaria vulgaris»   (исп. “Сalabaza” - калабаса) и трубочки для питья  (исп: “Вombilla”- бомбижья).

Калабас и Бомбижья представляют собой уменьшенную модель экстрактора, похожая конструкция экстракторов используется в современной фармацевтической промышленности для получения экстрактов. Этот метод получил название - Перколяция (от лат. Percolatio - процеживание). Подобная конструкция дает существенное преимущество над обычным способом настаивания в чайной посуде. Теоретически максимально возможное количество действующих веществ, способное перейти из сырья в экстрагент при настаивании, не превышает 50 % по закону осмоса. Это в теории, в реальных же условиях процент перехода едва ли достигнет 35%.

При использовании традиционных для Южной Америке атрибутов для питья Йерба Мате - калабаса и бомбижьи, экстрагент проходит через сырье и тут же удаляется, увлекая вместе с собой часть действующих веществ, цикл повторяется до полного истощения сырья. Большим преимуществом является то, что на сырье каждый раз подается чистый экстрагент, это создает постоянную разницу концентраций и в дальнейшем более полный переход действующих веществ из сырья в водное извлечение. 

Очень важным моментом является стадия смачивания сырья. Благодаря наполнению на 2/3 от объема тыквы и предварительному смачиванию перед началом церемонии, экстрагент проникает внутрь клеток сырья, смачивает и растворяет высохший клеточный сок и соответственно вещества, находящиеся в нем.  Это сильно облегчает дальнейший процесс экстракции. При использовании холодной воды на стадии смачивания, удается избежать горького вкуса, так как вещества, придающие горечь (сесквитерепены и дубильные вещества), плохо растворимы в холодной воде.

Использование сосуда из натурального материала – тыквы (Калабаса), также оказывает влияние на полноценный процесс экстракции. При постоянном  использовании на  пористой внутренней стенке калабаса частично адсорбируются поверхностно- активные вещества, которые в дальнейшем могут облегчить растворение веществ внутри клетки на стадии смачивания. Действующие вещества из Йерба Мате переходят в водный раствор, как упоминалось ранее, по закону осмоса (из зоны большей концентрации в зону меньшей концентрации). Следовательно, неполное удаление водного извлечения на предыдущей стадии может снизить процент перехода экстрактивных веществ из сырья в водный раствор в дальнейшем. Форма бомбижьи, её нижняя часть в виде ситечка, установленная на дне калабаса позволяет более полно удалять водное извлечение на каждой стадии, что обеспечивает на следующей стадии более полный переход действующих веществ в раствор. Также такая конструкция обеспечивает направленное движение экстрагента сквозь все сырье сверху вниз.

При втягивании экстракта через  бомбижью, водное извлечение попадает в ротовую полость постепенно, омывая всю ее слизистую, при этом определенное количество действующих веществ Йерба Мате всасывается в общий кровоток. В ротовой полости биодоступность действующих веществ достигает максимальных значений.

Серьезное влияние на экстракцию оказывает качество и температура воды. Рекомендуемый температурный диапазон температуры воды оптимальный для наилучшего приготовления Йерба Мате – 65С-85С. Присутствие  определенных ионов в воде может увеличивать степень перехода одних веществ, при этом   уменьшая степень перехода других.